经建永^1,2 , 陈曦^1,2 , 马百强^1,2 , 耿文娟^1,2*

1 新疆农业大学林学与园艺学院, 乌鲁木齐, 830052; 2 新疆园艺作物种质资源与高效生产重点实验室, 乌鲁木齐, 830052
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 22 篇   
收稿日期: 2019年11月28日    接受日期: 2019年12月06日    发表日期: 2021年03月23日

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为建立适合新疆野生欧洲李的 ISSR-PCR 反应体系，本研究以野生欧洲李为供试材料，采用 L16(45)正交试验设计和单因素试验设计相结合的方法，对影响野生欧洲李 ISSR-PCR 反应体系的 5 个因素(DNA 模板, Taq 酶, dNTPs, 引物, Mg2+)进行筛选与优化，对 16 条引物的退火温度进行筛选。结果表明，Taq 酶对 PCR扩增反应的影响最大，野生欧洲李 ISSR-PCR 最佳反应体系为：总体积 20 μL，5 U Taq 酶 0.10 μL，10 mmol/L引物 1.00 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.50 μL，10×Buffer (含 Mg2+) 2.00 μL，50 ng/μL DNA 模板 1.00 μL，双蒸水14.40 μL。建立的 ISSR-PCR 反应体系经过 22 份野生欧洲李样品验证，表明反应体系稳定可靠，可用于后续遗传多样性研究，为野生欧洲李种质资源的保护和利用提供理论参考。
 

野生欧洲李； ISSR-PCR；正交试验； 单因素试验； 体系优化